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4天是怎樣濃縮為4小時的———豬鏈球菌2型檢測方法出臺的前前后后(組圖)


http://whmsebhyy.com 2005年08月11日 00:39 中國質量報
4天是怎樣濃縮為4小時的———豬鏈球菌2型檢測方法出臺的前前后后(組圖)
  目前,全國正在對城區各農貿市場的肉類攤點進行豬鏈球菌病毒專項檢查,以杜絕市場無檢肉類存在。而面對疫情,更新驗測方法則迫在眉睫。李典利蔡宏波攝

  目標鎖定

  4小時即可知道結果的豬鏈球菌2型檢測方法,8月1日在北京通過了專家鑒定,而在過去,要獲得同樣的檢測結果,則需要4天的時間。面對重大突發應急事件,中國檢驗檢疫科學研究院(以下簡稱“檢科院”)與江蘇檢驗檢疫局緊急聯合攻關,6天就建立了快速檢測方法,而原定時間是1個月。該方法快速、準確,達到了國際先進水平,對有效防范豬鏈球菌病的傳入傳出意義重大。

  疫情/一聲令下

  2005年6月,我國四川等地突然爆發所謂“怪病”,出現人員感染并有死亡報告。7月25日,衛生部和農業部聯合公布,自6月24日以來發生在四川的不明原因疾病是由豬鏈球菌2型感染引起的。

  截至8月1日,累計發病174例,死亡34例。香港、廣東等地也有人感染的報告。

  豬鏈球菌病是一種人畜共患的急性傳染病。豬鏈球菌分為35個血清型,以2型流行最廣,致病性最強,可引起豬的敗血癥、腦膜炎、關節炎、支氣管炎,也可引起人的腦膜炎、心內膜炎及永久性的聽力喪失。

  盡管豬鏈球菌病是世界各國常見的一種豬傳染病,但由于該病發病迅猛,潛伏期短,短則兩小時,長則2~3天,所以還是在群眾中引起了恐慌。

  隨著疫情的發生、發展,從我國進口豬和豬肉及其制品的一些國家和地區,先后提出停止進口或入境時必須嚴格檢疫的要求。為了控制疫情,開發出一種方便、快捷、敏感的檢測技術勢在必行。

  國家質檢總局發出緊急通知,向有關貿易國和港澳有關單位進行通報,并特別批示,要加強對豬鏈球菌快速檢測技術的研究,增加對豬鏈球菌2型的檢疫,并盡快制定檢疫標準和操作規范。

  7月26日一大早,檢科院副院長、動檢所所長陳洪俊行色匆匆,動檢所動檢室的所有人員都被火速召集起來,發掘一切可利用的渠道,分工查詢。下午5時10分,一份《關于報送豬鏈球菌病有關建議和措施的報告》呈送到了質檢總局有關司局的案頭。

  韓雪清,清華大學生物系博士后;林祥梅,動檢室主任,博士。兩位年輕的女性,是這個項目的負責人。參與此次實驗的,還有賈廣樂、吳紹強、劉建、張永國、梅林等5位年輕的技術骨干。連續十幾個小時的實驗,對這群年輕人來說,已是家常便飯。韓雪清告訴記者,一個星期以來,他們每天最多只能睡1小時。

  豬鏈球菌病的流行病學非常復雜,目前國內外檢測豬鏈球菌2型的方法,主要還是經典的細菌分離、鑒定和血清學等方法,其周期長,一般需3~7天。由于缺乏更加敏感、快速的診斷技術和檢測方法,一些人群耽誤了治療而導致死亡。

  如何找到一種快速的檢測方法?科研組面臨的最大難題,首先是菌種的來源問題。

  他們了解到,1998年、1999年連續兩年的夏季,在江蘇省的南通地區,曾爆發過大面積流行性豬鏈球菌2型,豬群的發病率和死亡率均在50%左右,并導致特定人群感染致死。

  江蘇檢驗檢疫局應該有豬鏈球菌的研究基礎。那么,能不能采用江蘇檢驗檢疫局的豬鏈球菌2型核酸,建立一種多重PCR方法呢?

  攻關/廢寢忘食

4天是怎樣濃縮為4小時的———豬鏈球菌2型檢測方法出臺的前前后后(組圖)
  7月27日下午,江蘇檢驗檢疫局火速派出陳國強、張敬友飛往北京。雙方對技術方案進行了反復論證。

  7月28日上午10時,在國家質檢總局的會議室里,動植檢司和食品安全局的領導坐在了一起,再次對技術方案進行研究。當問及多長時間能拿出多重PCR檢測方法時,陳洪俊一口答道:“一個星期!”而在此前申請立項的計劃書中,陳洪俊的目標是:“爭取在2005年7月份完成所有豬鏈球菌2型快速檢測方法的建立。”

  盡管檢科院擁有現代化的科研實驗室,盡管他們具有一批攻關能力極強的技術隊伍,但一個月的計劃,壓縮在一周內完成,說老實話,陳洪俊心里也沒底。可是,開弓沒有回頭箭。

  一周內,僅他們要完成的技術路線就有:引物的設計與合成,菌液培養,樣品前處理,基因組DNA提取,還要進行PCR產物鑒定、特異性試驗,以及豬鏈球菌在肉品中的監測等等。

  每天都是盒飯,每天1小時的睡眠,協調各項工作,陳洪俊的手機,半天就得換電池。副所長施宗偉每晚都是凌晨兩點鐘才離開單位。

  雖然江蘇檢驗檢疫局有豬鏈球菌的研究基礎,可是科研組又面臨一個問題,就是菌種的生物安全問題。

  活的菌種有安全之患,只有滅活的菌種才可以攜帶。如何才能拿到滅活的菌種呢?

  他們把希望寄托在江蘇檢驗檢疫局的同事們身上。為了這次特殊的任務,采集滅活的菌種,成了檢科院工作的重中之重。7月29日,檢科院院長王大寧派陳洪俊等3人去江蘇,協商菌種一事。

  江蘇檢驗檢疫局局長車文毅和副局長陳建東當即表示,一定盡全力支持、配合檢科院,完成此次任務。由于江蘇檢驗檢疫局的雪中送炭,一份“檢科院須按照生物安全條例進行運輸、保存、使用,并負責由此產生的責任”的《滅活菌使用協議》,順利簽訂。

  按照生物安全條例,菌種不允許航空運輸,只能通過鐵路運輸。當晚,陳洪俊等人連夜飛回北京,留下一人坐火車,專程護送菌種進京。

  7月30日早8時,滅活的菌種安全到達北京,立即投入實驗。中午1時,結果出來了。

  成功/功在合作



4天是怎樣濃縮為4小時的———豬鏈球菌2型檢測方法出臺的前前后后(組圖)
  7月30日下午3時,盡管是周六,盡管又困又累,但大家還是圍坐在一起,細心地將整個實驗過程梳理了一遍。

  建立的多重PCR方法,是不是敏感,是不是特異,還有大量的實驗要做。

  除了采集市場上的豬、羊肉進行污染驗證外,他們還要做活菌的污染實驗。而活菌的污染實驗,必須在P3實驗室才可以完成。

  使用P3實驗室有嚴格的管理規定。正值周末,到處找不到人。經過多方聯系,中國人民解放軍軍事醫學科學院5所愿意為科研組提供P3實驗室和豬鏈球菌2型標準株。

  實驗結果表明,多重PCR方法特異性強,敏感性高,包括樣品的前處理,僅用4個小時。不僅如此,該方法既可用于鑒定攜帶豬鏈球菌的豬,也可用于鑒定攜帶豬鏈球菌血清2型的豬。

  陳洪俊懸著的一顆心,終于落了下來,他立即把這一消息報告給檢科院院長王大寧和質檢總局動植檢司司長俞太尉。王大寧要求,一定要把工作做扎實,爭取在8月1日召開成果鑒定會。

  為了確保萬無一失,檢科院黨委書記兼副院長秦貞奎、副院長唐英章周末趕到一線,與大家一起,一字一句地對技術材料進行修改、斟酌。

  科技查新報告是鑒定會的必審程序。8月1日早7時,科研人員趕往中國農科院信息研究所,中午12時,查新報告就出來了,只用了5個小時。而按照往常的經驗,科技查新報告程序復雜,至少需要7個工作日。

  2005年8日1日下午3時,鑒定會在北京如期舉行。以中科院院士田波為主任委員的專家鑒定委員會一致認為,針對我國突發豬鏈球菌病疫情,課題組在較短時間內,設計了具有自主知識產權的豬鏈球菌16S核糖體RNA、莢膜多糖(CPS2J)基因的特異性引物,建立了多重PCR方法檢測豬鏈球菌和豬鏈球菌2型。該項目設計合理,技術先進,數據可靠,方法快速、準確,為防止豬鏈球菌2型的傳入傳出、促進相關動物及其產品的進出口貿易,提供了有力的技術支持,其整體研究達到國際先進水平。

  檢科院的快速反應,緣于其雄厚的技術力量和高素質的科研隊伍。

  國家質檢總局于大海研究員認為,近年來,中國檢科院在重大突發應急事件中,發揮了大局意識強、政治敏感性高、反應迅速、科技攻關能力突出的特點,為我國貿易的正常進行提供了強有力的技術支撐。比如2001年建立了動物源性飼料中牛羊源性成分檢測方法,有效組織“瘋牛病”傳入境內;2003年“非典”疫情期間,18天攻克了食品動植物及其產品中SARS病毒的檢測技術研究;2005年紅火蟻疫情發生時,迅速研發出紅火蟻實時熒光PRC分子檢測方法,為疫情的防控發揮了重大作用。另外,在“炭疽熱”、“禽流感”、“農獸藥殘留”、“蘇丹紅”等一系列熱點技術的研制上,均取得了重大突破。

  作者:本報記者 王惜純/文



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